성분•독성시험

성분분석

 

 

 

 

독성시험 최종보고서

 다음의 독성시험 최종보고서는 식품의약품안정청(KFDA)에 밀리타리스 동충하초를 식품으로서 사용허가를 얻기 위해 장백 실크 밀리타리스 동충하초 농장의 농민 이재일이 본 농장에서 생산된 밀리타리스 동충하초(기주;번데기)를 시험재료로 사용하여 한국화학연구소 안전성연구센터(KGLP)에서 최종보고서인 성적서를 받은 것이다.

 

최종보고서(독성시험)

신뢰성보증증명

 

 진     술     서

 

 

시험제목 : 밀리타리스 동충하초(학명 : Cordyceps militaris, 기주 : 번데기)의 랫트를 이용한 단회 경구투여 독                    성시험

시험번호 : G 99057

시험목적 :  밀리타리스 동충하초(학명 : Cordyceps militaris, 기주 : 번데기)의 랫트를 이용한 단회 경구투여에 의한 독성시험의 정보를 얻기 위하여 실시하였다.

시험방법 : 식품의약품안전청 고시 제 1998-116호(1998년 12월 8일)의 "의약품등의 독성시험기준"에 준하여 실시하였다.

시험일정 :

 

1).시험계획서 승인일

:   1999년 6월 4일

2). 동물입수일

:   1999년 6월 10일

3). 검역•순화기간

:   1999년 6월 10일 ~ 1999년 6월 16일

4). 투여일

:   1999년 6월 17일

5). 부검일

:   1999년 7월 1일

6). 최종보고서(안)제출일

:   1999년 7월 13일

7). 최종보고서 제출일

:   1999년 7월 16일

 

시험의뢰자

   명          칭 : 장백 동충하초   이 재 일

   소    재   지 : 경기도 여주군 대신면 율촌1리

   의뢰책임자 : 이  재  일

 

시험기관

   명          칭 : 한국화학연구소 안전성연구센터

   소    재   지 : 대전광역시 유성구 장동 100번지

   소          장 : 김  충  섭

   운영책임자 : 강  부  현

 

동물사육실 : 중동물동 2호실

 

시험물질의 보관

본 시험에 사용한 시험물질은 한국화학연구소 안전성연구센터의 시험물질 조제분석실의 시험물질 보관고{보관고 번호 : TRC-401(21)}에 의뢰자가 요청한 보관상 유의사항에 따라 보관하였으며 시험기관내 코드번호(K-1017)를 부여하였다.

 

시험자료의 보관

본 시험의 시험기초자료 및 관계자료는 한국화학연구소 안전성연구센터의 자료보관실에 보관하였다.

시험기초자료(문서류, 디스켓류) : 자료보관실 2실

시험계획서, 최종보고서(원본)    : 자료보관실 2실

 

시험관계자

   부     문

책임자

             시험자

동 물  시 험

김갑호

배주현, 정태천, 이승용, 차신우

조 제  분 석

신호철

유승룡, 손미화

병 리  조 직

하창수

부   검 : 김용범, 김일환

전산 • 통계

서정은

조미림, 김보령

신뢰성보증

신천철

김희영, 김하강

자 료  보 관

이현숙

조영미

 

 

본 시험은 시험책임자의 책임하에 위의 각 시험자들이 수행하였고, 시험성적의 종합평가는 시험책임자가 중심이 되어 관련 책임자들과 함께 실시하였다.

 

 

 

 

1. 요   약

시험물질 밀리타리스 동충하초(학명 : Cordyceps militaris, 기주 : 번데기)의 단회 경구투여에 의한 독성을 조사하기 위하여 SD 계통의 랫트에 암수 각각 0 및 2000㎎/㎏의 용양으로 5마리씩 1회 경구투여하여 14일간의 사망률, 일반증상, 체중변화 및 부검소견을 관찰하였다.   그 시험결과는 다음과 같다.

 

(1) 시험물질에 의한 사망례는 암수의 모든 시험군에서 시험기간동안 관찰되지 않았다.

(2) 일반증상의 경우 암수의 모든 시험군에서 관찰기간 동안 시험물질의 투여와 관련된 어떠한 이상증상도 관찰되지 않았다.

(3) 체중변화의 경우 암수의 모든 시험군에서 정상적인 체중증가를 나타내었다.

(4) 계획도살 부검소견의 경우 암수의 모든 시험군에서는 육안적 이상소견은 관찰되지 않았다.

 

따라서 암수동물에 대한 본 시험물질의 LD50값은 암수 모두 2000㎎/㎏을 상회할 것으로 사료된다.

 

 

2. 시험물질 및 매체

 

(1) 시험물질 (첨부자료 No. 1)

      1) 명 칭 : 밀리타리스 동충하초(학명 : Cordyrceps Militaris, 기주 : 번데기)

      2) 시험기관내 코드번호 : K-1017

      3) 로트번호 : 99-1

      4) 입 수 일 : 1999년 4월 9일

      5) 입 수 량 : 91 g

      6) 외관 및 성상 : 황토색분말

      7) 보관조건 : 냉장보관[보관고 번호 : TRC-401(21)]

 

(2) 매체

      1) 명 칭 : 0.5% CMC (carboxymethylcellulose)

      2) Lot No. : 07326-3

      3) 보관조건 : 실온보관[보관고 번호 : TRC-401(35)]

      4) 공 급 처 : 일본약리화학공업주식회사

 

 

3. 재료 및 방법

(1) 시 험 계

      1) 종 및 계통

         SD 계통의 특정병원균 부재(SPF) 랫트

      2) 공급원

         한국화학연구소 안전성연구센터 실험동물육종실

         주 소 : 대전광역시 유성구 장동 100번지

      3) 시험계의 선택이유

         랫트는 독성시험에 적당한 실험동물로서 급성독성시험에 널리 사용되고 있다. 본 계통의 랫트는 풍부한 시험기초자료가 축적되어 있어서, 시험결과의 해석 및 평가시에 이러한 자료를 이용하는 것이 가능하다.

      4) 주령 및 체중범위

▶ 수  컷

 . 입수시 주령

: 4주령

 

 . 입수시 동물수

: 12마리

 

. 입수시 체중

: 79.2∼97.5 g

 

. 투여개시시 주령

: 5주령

 

. 투여개시시 동물수

: 10마리

 

. 투여개시시 체중

: 119.3∼136.1 g

▶ 암  컷

. 입수시 주령

: 4주령

 

. 입수시 동물수

: 12마리

 

. 입수시 체중

: 79.4∼96.4 g

 

. 투여개시시 주령

: 5주령

 

. 투여개시시 동물수

: 10마리

 

. 투여개시시 체중

: 99.8 ∼118.7 g

 

5) 검역 및 순화 (첨부자료 No. 2)

동물입수후 외관을 육안적으로 검사한 후 7일간 시험을 실시하는 동물실에서 순화시킨후 일반증상을 관찰하여 건강한 동물만을 시험에 제공하였다.

 

(2) 사육환경

1) 환경조건

본 시험은 온도 23±3'C, 상대습도 55±15%, 조명 시간 12시간(오전 8시∼오후 8시) 및 조도 150∼300 Lux로 설정된 한국화학연구소 안전성연구센터 중동물동의 2호실에서 실시되었다. 시험자들은 모두 고압증기멸균(121'C, 20분)된 작업복, 두건, 마스크 및 장갑등을 착용하고 작업을 실시하였다.

 

2) 사육환경 모니터링 (첨부자료 No. 3)

시험기간중 동물실들의 온습도는 자동은습도측정기에 의하여 매시간마다 측정되었으며, 조도등의 환경조건은 정기적(3개월에 1회)으로 측정되었다. 환경측정의 결과, 시험에 영향을 미칠것으로 사료되는 변동은 없었다.

 

3) 사육상자, 사육밀도 및 사육상자의 식별시험기간동안 스테인레스제 망사육상자(220w x 410L x 200H mm)를 이용하여 순화기간에는 4마리씩,투여와 관찰기간중에 5마리씩을 수용하였다. 시험기간중 사육상자에는 시험번호 및 동물번호를 기입한 개체식별카드(매체대조군:백색,T1:황색)를 붙였다.

 

4) 사료 및 물

㉠ 사료의 급여방법 (첨부자료 No. 4∼6)사료는 실험동물용 고형사료(제일사료 주식회사 . 대전광역시 대덕구 대화동 40-36)를 방사선(2.0 Mrad) 멸균하여 자유섭취시켰다. 또한 당 연구소 실험동물실과 제일사료 주식회사에서 미생물 및 오염물질 확인시험을 실시한 바, 본 시험에 영향을 미칠만한 요인은 발견되지 않았다.

㉡ 물의 급여방법 및 오염물질의 확인 (첨부자료 No. 7)물은 상수도수를 자외선살균기로 소독시킨 후 자유섭취시켰다. 물에 대하여는 급여전에 미리 대전광역시 보건환경연구원(대전광역시 유성구 구성동 21-7)에 의뢰하여 일반수질검사를 실시하였다. 물중의 오염물질 분석에 있어서 시험에 영향을 미치는 요인은 발견되 지 않았다.

 

(3) 투여량 및 시험군의 구성

1) 투여량 설정

 본 시험물질은 한약재로서 예비시험(P99044)결과 한계용량인 2000㎎/㎏의 용량에서 사망동물이 관찰되지 않아 한계용량시험의 일환으로 최고용량을 2000 ㎎/㎏으로 하고, 매체를 투여하는 매체대조군만을 두었다. 단, 식품의약품 안전청의 '의약품등의 독성시험기준'에는 한계용량에 대한 기준이 없기 때문에 일본 후생성의 "의약품 비임상시험 guideline 해설 (1997)"을 참고하였다.

     

2) 시험군의 구성, 투여농도 및 용량

성별

동물수(마리)

동물번호

투여액량(㎖/㎏)

투여량(㎎/㎏)

Vehicle

Male

 5

1∼ 5

 20

 0

Control

Female

 5

11 ∼15

 20

 0

T1

Male

 5

6 ∼10

 20

2000

Female

 5

16 ∼20

 20

2000

 

  3) 군분리 및 동물식별

동물의 군분리는 다음과 같이 실시하였다. 우선, 순화기간중 건강하다고 판정된 동물의 체중을 측정한 후 5g 간격으로 구분시켜 두었다. 그리고 암수 각각의 평균체중에 가까운 개체를 암수 각각 10마리씩을 선택하였다. 5g 간격으로 구분되어 선택된 암수 각 10마리를 암수 각 군에 5마리씩 균등히 들어가도록 체중을 이용한 무작위법을 이용하여 분배하였다. 동물의 개체식별은 피모색소마킹법 및 개체식별카드 표시법으로 실시하였다.

  

(4) 시험물질의 투여

1) 투여액의 조제법

투여직전에 주사용 생리식염수를 매체로 하여 시험물질을 2000㎎/20㎖/㎏으로 조제하였다. 매체대조군(vehicle control)의 동물에는 매체인 0.5 % CMC만을 투여하였다.

 

2) 투여경로 및 투여방법

투여전날 하룻밤을 절식시킨 후 경구투여용 존데(sonde)를 장착한 주사기를 이용하여 조제시험물질을 강제 경구투여하였다.

     

3) 투여경로 선택이유

임상예정 경로로서 경구투여를 선택하였다.

     

4) 투여횟수 및 투여기간

투여당일 오전에 개체별로 단회 투여하였다.

     

5) 투여액량 계산

투여당일의 측정된 체중을 기준으로하여 투여액량(20㎖l/㎏)을 계산하였다.

  

(5) 관찰 및 검사항목

1) 일반증상 및 사망동물의 관찰

투여당일은 투여후 1시간에서 6시간까지는 매시간마다. 투여익일부터 14일까지는 매일 1회 이상씩 일반증상 및 사망동물의 유무를 관찰하였다.

     

2) 체중측정

시험에 사용된 모든 동물에 대하여 투여개시전과 투여후 1, 3, 7 및 14일에 체중을 측정하였다.

     

3) 부검소견

전 생존동물을 CO2가스 마취후 개복하여 방혈치사시킨 후 육안적으로 모든 내부장기를 관찰하였다.

  

(6) 통계학적 방법

한국화학연구소 안전성연구센터의 SOP 및 Labcat module (Innovative Programming Associates, Inc., U.S.A.)에 따르는 통계처리를 실시하였다.

  

 

4. 결 과

(1) 사망율 및 LD50값 (Tables 1,2, Appendices 1,2)

암수의 매체대조군 및 2000 mg/kg 투여군에서 시험기간을 통하여 사망동물은 관찰되지 않았으며, 암수동물에 대한 본 시험물질의 LD50값은 각각 2000 ㎎/㎏을 상회할 것으로 사료된다.

  

(2) 일반증상 (Tables 3, 4, Appendices 1, 2)

수컷, 2000 ㎎/㎏투여군의 1례에서 투여후 1일째에 피모의 더럽혀짐(soiled fur)이 관찰되었는데, 이는 시험물질의 투여에 따른 소견이라기보다는 투여후 2일째부터는 증상이 소실된 것으로 보아 동물의 개체 차이에 의해 발생한 일시적인 현상으로 사료된다. 이 이외의 암수 모든 시험군에서는 관찰기간동안 어떠한 이상증상도 관찰되지 않았다.

  

(3) 체중변화 (Tables 5, 6, Appendices 1, 2)

암수의 모든 시험군에서 투여후 1, 3, 7 및 14일째 정상적인 체중증가가 관찰되 었다.

  

(4) 부검소견 (Tables 7, 8, Appendices 1, 2)

암수의 모든 시험군에서 육안적으로 이상이 있는 부검소견은 관찰되지 않았다.

  

 

5. 고찰 및 결론

시험물질 밀리타리스 동충하초(학명 : Cordyceps militaris, 기주 : 번데기)에 대한 단회 경구투여 독성시험을 암수 SD계통의 랫트를 이용하여 실시한 결과, 시험기간동안 사망율, 일반증상, 체중변화 및 부검소견에 있어서 시험물질의 투여에 기인한 변화는 관찰되지 않았다. 따라서 암수동물에 대한 본 시험물질의 LD50값은 각각 2000 ㎎/㎏을 상회할 것으로 사료된다.

  

 

6. 참고문헌

(1) 일본후생성(1997) : 의약품 비임상시험 guideline 해설

 

 

 대표농민 : 이 재 일    

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